上海辰麥檢測(cè)技術(shù)中心日常生物TEM透射電鏡測(cè)試的一般步驟、方法和注意事項(xiàng)如下： 1.取 材 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜〔模蟛课粶?zhǔn)確，體積小于1 mm3;
2.醛類固定 用2%～3%的戊二醛固定8小時(shí);
3.清 洗 用磷酸緩沖液清洗3次，每次10分鐘;
4.鋨酸固定 用1%～2%的鋨酸固定 2～3小時(shí);
5.清 洗 用磷酸緩沖液清洗3次，每次10分鐘;
6.脫 水 用30%、50%、70%、80%、90%的乙醇梯度脫水各20分鐘，100%乙醇脫水3~4次，每次30分鐘;
7.置 換 用環(huán)氧丙烷或丙酮置換3次，每次30分鐘;
8.浸 漬 3(丙酮)︰1(包埋劑)浸漬1~2h; 1(丙酮)︰1(包埋劑)浸漬4~6h; 1(丙酮)︰3(包埋劑)浸漬12h或過(guò)夜; (體積比V/V);
9.包 埋 第二天上午10點(diǎn)左右，把3：1浸漬好的樣品直接放到加好純包埋劑的包埋板里，包埋劑為Epon812;
10.聚 合 放入35℃烘箱，3~4h后取出來(lái)，把樣品定向、定位后再放回35℃烘箱。24h后，把烘箱溫度調(diào)到40℃，聚合48h, 60℃聚合48h，聚合完成;
11.修 塊 將包埋頭修成梯形，且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm;
12.超薄切片 切片厚度50～90nm, 切片機(jī)：萊卡UC7;
13.染 色 鈾染色 5～15分鐘 清 洗鉛染色 5～10分鐘 清 洗;
14.拍 照 設(shè)備加速電壓80kv.
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