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乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)法

   日期:2024-11-01 22:15:32     來源:檢測     作者:中企檢測認(rèn)證網(wǎng)     瀏覽:22    評(píng)論:0
核心提示:本方法源自奶牛乳房炎防治技術(shù)指南(試行)(農(nóng)醫(yī)發(fā)[20l0]29號(hào))推薦使用體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)。體

本方法源自奶牛乳房炎防治技術(shù)指南(試行)(農(nóng)醫(yī)發(fā)[20l0]29號(hào))

推薦使用體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)。

體細(xì)胞計(jì)數(shù)法有直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。直接計(jì)數(shù)法中簡便易行的方法是直接用顯微鏡進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)(SCC),間接計(jì)數(shù)法就是后面提到的CMT。法。

l主要試劑和材料

美藍(lán)染色液:美藍(lán)乙醇飽和溶液30mL.(美藍(lán)2g,95%乙醇100mL),10%氫氧化鈉溶液0.1mL,蒸餾水100mL,將上列溶液混合搖勻,過濾后備用。二甲苯、95%乙醇。生物顯微鏡、載玻片、l0μL。微量加樣器(或移液槍)等。

2操作方法

2.1涂片制備

涂布:充分搖勻新鮮乳樣,用l0μL微量加樣器吸取中部乳汁l0μL,或用接種環(huán)蘸取等量的乳汁,將乳樣滴于玻片一端中側(cè),仔細(xì)涂布成約lcm2。面積的乳膜(為便于操作,可在玻片下墊襯一張硬紙板,紙板上用毛筆劃數(shù)個(gè)面積為lcm2的方格透視)。

干燥、脫脂、固定:涂好乳膜的玻片于37℃溫箱中干燥,然后用二甲苯脫脂5min,再置95%乙醇中固定5~10min。

染色:玻片干燥后,用美藍(lán)染色液染色5min。水洗,再用95%乙醇脫色數(shù)分鐘,水洗干燥后鏡檢。

鏡檢及計(jì)數(shù):在生物顯微鏡油鏡下觀察(最好用l0×目鏡,其視野直徑要求為0.016),計(jì)數(shù)100個(gè)視野內(nèi)的細(xì)胞數(shù),然后用下式計(jì)算:SCC=100xN/Лr2

視野面積Лr2=3.1416×(0.016/2)2。=0.0002cm2,

顯微鏡系數(shù)N=I/0.0002×100=500,000

SCC=系數(shù)×每個(gè)視野的細(xì)胞平均數(shù)(即細(xì)胞總數(shù)÷100):細(xì)胞數(shù)/mL乳。

3判定標(biāo)準(zhǔn)

隨著國際和國內(nèi)乳品行業(yè)的接軌,國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)也在提高,一般以每毫升牛奶中含20萬個(gè)細(xì)胞為亞臨床乳房炎的臨界值(+);超過該值為陽性,低于該值則正常。

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