1、定位準(zhǔn)確：取材部位解剖水平的準(zhǔn)確定位要求誤差應(yīng) ≤ 1mm。注意各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織取材區(qū)位及方位的一致性和代表性。
2、操作迅速：組織離開(kāi)活體后，以最快的速度浸入醛類固定液，0.5 min或最多2 min。 先準(zhǔn)備好2mlEP管，里面盛滿預(yù)冷的醛類固定液。提示：最好在解剖前做灌注固定，而對(duì)腦、脊髓、睪丸等組織則必須做灌注固定。
3、標(biāo)本尺寸大小：組織塊的粒徑大小必須與固定液的穿透率(≤0.5mm)相適應(yīng)，樣品塊過(guò)大，內(nèi)部固定不良;樣品過(guò)小，觀察內(nèi)容受限。可參照下圖取材。提示：把較大標(biāo)本塊修整成符合要求的形狀時(shí)，須事先準(zhǔn)備一個(gè)蠟盤(pán)，滴入醛類固定液，把標(biāo)本浸在液滴中修整，確認(rèn)每個(gè)小標(biāo)本條都包含需要的結(jié)構(gòu)內(nèi)容，再用牙簽挑出三小塊，放入2ml EP管，密閉，4℃保存。
4、操作輕柔、清潔：取材操作動(dòng)作始終保持輕柔，盡可能避免金屬器具對(duì)組織的夾持、擠壓或牽拉，所用器具必須清潔，使用緩沖液清洗。
5、保持低溫環(huán)境：為降低自溶酶活性，在4℃低溫條件下取材，容器和器械預(yù)冷;將修整好的標(biāo)本塊放入醛類固定液后，4℃冰箱保存。
提示：
?初固定之后，盡早進(jìn)入制備程序;存放3天以上，須更換固定液。
?注意：既要保持低溫，又要避免EP管接觸冰塊，固定液 要充滿標(biāo)本小瓶，蓋緊瓶蓋，用膠布加固，以免郵寄途中液體滲出。
為了得到精美的TEM照片，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真做好最關(guān)鍵的第一步取材!
1、確認(rèn)細(xì)胞數(shù)量≥105，根據(jù)研究目的，選擇最佳取材時(shí)間;
2、調(diào)整醛類固定液pH與培養(yǎng)基pH相同并等滲;
3、貼壁細(xì)胞用柔軟細(xì)胞刮子輕輕刮起，成細(xì)胞懸液;
4、把細(xì)胞懸液置入潔凈離心管，或圓底EP管(2ml);
5、選擇合適的離心速度和時(shí)間，3000-5000轉(zhuǎn)，5~10分鐘，形成細(xì)胞團(tuán)塊;
6、用牙簽輕輕挑起細(xì)胞團(tuán)塊，若致密柔韌，即棄上清，注入新鮮醛類固定液，4℃保存;
7、及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)入電鏡樣品制備程序。
提示：
A.取離心好的細(xì)胞團(tuán)塊時(shí)，如細(xì)胞分散開(kāi)，可在離心管中注入約5μl血清再離心，至EP管底部出現(xiàn)致密細(xì)胞團(tuán)塊。
B. 細(xì)胞大小不同，最佳離心富集速率和時(shí)間不同。事先檢索文獻(xiàn)，避免反復(fù)離心損傷細(xì)胞。
C. 在上述第(5)步驟之前，用緩沖液離心1~2次，可以清除培養(yǎng)基中的雜質(zhì)。但此 操作要注意：緩沖液要新鮮，緩沖液與培養(yǎng)基等滲，pH近似。由于各實(shí)驗(yàn)室配制緩沖液方法和保存時(shí)間等差別很大，由緩沖液欠佳帶來(lái)的損傷不容忽視，請(qǐng)使用前斟酌。
D. 快遞標(biāo)本注意：
?4℃保存;
?避免標(biāo)本瓶直接接觸冰塊;
?固定液要充滿樣品容器，確認(rèn)蓋緊瓶蓋，最好用膠布加固，以免郵寄途中液體滲出(此種情況常見(jiàn))。
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