昆明石杉HuperziakunmingensisChing.系石杉科石杉屬植物，為我國特有種，主要分布于云南、貴州等地，生于灌木下、苔蘚叢中[1]。20世紀80年代，我國科學工作者從同屬植物蛇足石杉中分離到石杉堿甲(Hup-A)，并闡明它是一種可逆性乙酰膽堿酯酶抑制劑，對治療重癥肌無力、記憶力減退和早老年癡呆具有較好的效果[2，3]，現已被廣泛應用于臨床。為了科學、合理地利用石杉屬植物資源，本實驗首次采用HPLC法對昆明石杉中石杉堿甲的含量進行測定，為尋找和篩選石杉堿甲新的植物資源提供科學依據。
1、儀器與試藥
Aigent1100型HPLC色譜儀(帶四元泵，自動進樣器，紫外檢測器等);電子分析天平(日本島津);KQ50B超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(上海醫療器械廠);石杉堿甲對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100243-200401);乙腈(色譜純);二次重蒸水;其他試劑均為分析純。
實驗藥材采至貴州黔東南，由貴州科學院生物研究所王培善教授鑒定為昆明石杉H.kunmingensisChing.，標本存放于貴陽中醫學院民族醫藥研究所，標本憑證(20056)。
2、方法與結果
2.1色譜條件ZORBAXSB-C18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)，流動相0.02mol·L-1磷酸二氫鉀-乙腈(92∶8)，檢測波長為310nm，流速1ml·min-1，柱溫25℃，進樣量為5μl。在此色譜條件下，樣品中的石杉堿甲與其他峰能達到基線分離，其理論塔板數為4656，對稱因子為0.92。石杉堿甲的保留時間為11.15min，對照品與樣品的色譜圖見圖1。
2.2樣品的制備
精密稱取實驗藥材細粉2g于500ml的圓底燒瓶中，每次加入200ml石油醚提取3次，棄去濾液。濾渣再用95%的甲醇提取3次，合并濾液并回收溶劑，加入2%的酒石酸溶解，用氨水調節pH值至8.0，再用氯仿萃取至Dragendorffors反應呈陰性，揮干有機溶劑，用無水乙醇溶解并定容至25ml即得。
2.3線性關系的考察
精密稱取石杉堿甲對照品2.40mg于25ml容量瓶中以無水乙醇溶解并定容，得濃度為0.096mg·ml-1對照品溶液，再分別稀釋成0.096，0.048，0.024，0.012，0.006，0.003mg·ml-1的對照品供試液，在色譜條件下測定。以進樣濃度對峰面積進行回歸，得方程：Y=6776.0151X1.0305，r=0.99995。可知石杉堿甲在0.015～0.48μg之間與峰面積呈良好線性關系。
2.4精密度實驗取石杉堿甲對照溶液，在色譜條件下重復進樣6次，結果石杉堿甲峰面積的RSD為0.36%(n=6)。
2.5穩定性實驗取供試品溶液，每隔2h測定1次，考察石杉堿甲的含量變化，結果含量的RSD為0.85%(n=6)，表明供試品在10h內穩定。
2.6重復性實驗精密稱樣品6份，按“2.2”項的要求制備6份供試液，在色譜條件下分別進行測定，結果Hup-A含量的RSD為0.60%(n=6)。
2.7回收率實驗精密稱取昆明石杉藥材細粉6份，每份1g，分別加入對照品供試液(0.003mg·ml-1)100ml，按樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試液進行測定，計算回收率(見表1)。結果石杉堿甲的平均回收率為99.63%，RSD=0.56%(n=6)。表1石杉堿甲加樣回收率實驗結果(略)
2.8樣品的測定
按“2.2”項的要求精密稱取樣品3份，制備供試液，按色譜條件進行測定，重復3次，取平均值，石杉堿甲在原植物中的平均含量為0.03%。
3、討論
首次采用HPLC法測定昆明石杉中石杉堿甲的含量。
測定方法是在其它石杉中石杉堿甲含量測定[4，5]方法的基礎上，改用ZORBAXSB-C18色譜柱及以0.02mol·L-1磷酸二氫鉀-乙腈(92∶8)為流動相。實驗證明該方法易行、靈敏、準確、可靠。
在同科屬植物中，昆明石杉是石杉堿甲含量相對較高的一個植物品種，達到0.03%。
中企檢測認證網提供iso體系認證機構查詢，檢驗檢測、認證認可、資質資格、計量校準、知識產權貫標一站式行業企業服務平臺。中企檢測認證網為檢測行業相關檢驗、檢測、認證、計量、校準機構，儀器設備、耗材、配件、試劑、標準品供應商，法規咨詢、標準服務、實驗室軟件提供商提供包括品牌宣傳、產品展示、技術交流、新品推薦等全方位推廣服務。這個問題就給大家解答到這里了，如還需要了解更多專業性問題可以撥打中企檢測認證網在線客服13550333441。為您提供全面檢測、認證、商標、專利、知識產權、版權法律法規知識資訊，包括商標注冊、食品檢測、第三方檢測機構、網絡信息技術檢測、環境檢測、管理體系認證、服務體系認證、產品認證、版權登記、專利申請、知識產權、檢測法、認證標準等信息，中企檢測認證網為檢測認證商標專利從業者提供多種檢測、認證、知識產權、版權、商標、專利的轉讓代理查詢法律法規，咨詢輔導等知識。
本文內容整合網站：百度百科、搜狗百科、360百科、知乎、市場監督總局 、國家認證認可監督管理委員會、質量認證中心
免責聲明：本文部分內容根據網絡信息整理，文章版權歸原作者所有。向原作者致敬！發布旨在積善利他，如涉及作品內容、版權和其它問題，請跟我們聯系刪除并致歉！
